Ral A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424984

概要

マウスのRalaは小型GTPアーゼであるRal Aをコードしており、Ral AはRasスーパーファミリーのエフェクターとして、GTP結合型とGDP結合型の間を循環しながら膜輸送および細胞骨格ダイナミクスの協調を担います。Ral Aは、RalBP1/RLIP76やエキソシスト複合体などのエフェクターを介してシグナルを伝達し、小胞のドッキング、エンドサイトーシス、極性を伴うエキソサイトーシスを制御することで、細胞遊走や細胞質分裂に影響を与えます。さらにRas/MAPK経路およびPI3K経路の出力とのクロストークを通じて、Ral Aは増殖因子によって駆動される細胞構造のリモデリングや生存シグナル伝達にも寄与します。Ral GTPアーゼシグナルの破綻は、がん化（腫瘍性形質転換）、浸潤性の亢進、分泌プログラムの変化などに関与するとされており、Ralaはマウスモデルにおいて疾患関連シグナル伝達ネットワークを研究するための有用な遺伝学的ノードとなります。

Ral A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRala遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rala内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ralaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ral Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ral Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rala欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ral Aの機能に不可欠なRalaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ralaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ral A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRal A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rala遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ral A HDRプラスミド（m）および Ral A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRalaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRala標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。