Particules Lentivirales d'Activation (h) RAGE: sc-400284-LAC

Le gène humain **AGER** code le récepteur des produits de glycation avancée (**RAGE**), un récepteur multiligand de reconnaissance des motifs appartenant à la superfamille des immunoglobulines, qui se lie aux **AGE**, aux protéines **S100**, à **HMGB1** et à des espèces amyloïdes. La signalisation de RAGE amplifie les réponses inflammatoires et de stress via des voies incluant **NF-κB**, **MAPK/ERK**, **JNK/p38**, **PI3K/AKT** et un remodelage du cytosquelette dépendant des **GTPases Rho**. Un engagement prolongé du récepteur favorise la production de cytokines, l’expression de molécules d’adhérence, le stress oxydant et une altération de la fonction barrière dans les cellules endothéliales et immunitaires. Une activité dérégulée d’AGER/RAGE a été associée à des états inflammatoires chroniques et à un remodelage tissulaire en lien avec des complications du diabète, l’athérosclérose, la neuroinflammation et les lésions pulmonaires.

Les particules d'activation lentivirales RAGE (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de AGER dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales RAGE (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription AGER, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de RAGE. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif AGER ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.