Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rag C (m): sc-424807

Présentation

Rragc code Rag C, une petite GTPase lysosomale qui forme un hétérodimère avec RagA ou RagB afin de relier la disponibilité intracellulaire en acides aminés au recrutement et à l’activation de mTORC1 au niveau du lysosome. Par ses interactions avec le complexe Ragulator et les effecteurs en aval de mTORC1, Rag C contribue à réguler la synthèse protéique, l’autophagie, la biogenèse des lysosomes et la reprogrammation métabolique en réponse aux signaux nutritifs. Une signalisation dérégulée des GTPases Rag peut perturber les points de contrôle de la détection des nutriments et a été impliquée dans des phénotypes liés au contrôle de la prolifération, à la fonction des cellules immunitaires et à l’adaptation au stress cellulaire. Dans les modèles murins, Rag C soutient des études mécanistiques sur la croissance pilotée par mTOR et l’équilibre entre anabolisme et catabolisme au cours du développement et dans des contextes pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rag C (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rragc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rragc, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rragc à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rag C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rragc pour l'étude de la signalisation de Rag C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rragc essentiels à la fonction de Rag C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rragc pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rag C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Rag C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rragc. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rag C plasmide HDR (m) et le Rag C (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rragc pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rragc définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.