Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido CRISPR de Activación (h) RADX: sc-409991-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) RADX es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) RADX incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR RADX (h) y el plásmido de activación CRISPR RADX (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de CXorf57. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RADX Anticuerpo (A-3): sc-514563
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) RADX | sc-409991-ACT | 20 µg | $397.00 |
El gen humano CXorf57 codifica RADX, un factor de unión al ADN monocatenario que regula la estabilidad de las horquillas de replicación y coordina la respuesta celular al estrés replicativo. RADX contrarresta la actividad de RAD51 en horquillas detenidas para limitar la recombinación aberrante, lo que ayuda a preservar la integridad del genoma durante la fase S y en condiciones de daño del ADN. Por sus funciones en la replicación del ADN, el control de la recombinación homóloga y la señalización de puntos de control, RADX es relevante para estudios sobre inestabilidad cromosómica y procesos mutacionales que surgen por una protección defectuosa de la horquilla. La desregulación de la función de RADX se ha vinculado con cambios en la dinámica de replicación y en la elección de vías de reparación del ADN, lo que lo convierte en un punto de interés para analizar los mecanismos de mantenimiento del genoma.
RADX El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CXorf57 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
RADX El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CXorf57 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CXorf57, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RADX. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CXorf57 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RADX en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RADX en células tumorales con expresión de CXorf57 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.