Plasmide Double Nickase (h) Rad54B: sc-403794-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Rad54B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Rad54B Double Nickase (h) et le plasmide Rad54B Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RAD54B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rad54B Antibody (19-K2): sc-101234
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Rad54B | sc-403794-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Rad54B | sc-403794-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAD54B code Rad54B, une ATPase SWI2/SNF2 dépendante de l’ADN, qui intervient dans la recombinaison homologue en coopérant avec RAD51 pour remodeler l’ADN et favoriser l’invasion de brin lors de la réparation des cassures double brin. Rad54B contribue à la stabilité du génome via des rôles dans la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN, la réparation associée à la réplication et la récupération après stress génotoxique, ce qui la relie aux voies centrales de recombinaison homologue et aux voies de points de contrôle médiées par la recombinaison. Une activité altérée de RAD54B peut accroître l’instabilité chromosomique et la charge mutationnelle, des caractéristiques fréquemment étudiées dans le contexte de la biologie tumorale et des états de déficience des systèmes de réparation de l’ADN. En conséquence, RAD54B est largement étudié pour son impact sur l’efficacité de la recombinaison, la sensibilité aux agents génotoxiques et les mécanismes assurant un maintien fidèle des chromosomes.
Rad54B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAD54B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAD54B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAD54B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAD54B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.