Rad54 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401750

Descripción general

RAD54L codifica la ATPasa humana Rad54 dependiente de ADN, un remodelador de cromatina de la familia SWI2/SNF2 que coopera con RAD51 para promover la recombinación homóloga. Rad54 estabiliza y remodela los filamentos presinápticos de RAD51, estimula la invasión de cadena y favorece la reparación de roturas de doble hebra del ADN durante el estrés replicativo, contribuyendo a la integridad del genoma y a la competencia de los puntos de control del ciclo celular. La proteína actúa dentro de las redes de recombinación homóloga y de respuesta al daño del ADN, interactuando con factores clave de reparación para regular el procesamiento de los intermediarios de recombinación. La actividad alterada de RAD54L es relevante para fenotipos de inestabilidad cromosómica que se investigan con frecuencia en biología del cáncer y en modelos de reparación del ADN defectuosa.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rad54 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RAD54L en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RAD54L junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RAD54L tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rad54.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RAD54L para la investigación de la señalización de Rad54, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RAD54L críticos para la función de Rad54
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RAD54L para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rad54 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Rad54 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RAD54L. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rad54 (h) y el plásmido HDR Rad54 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RAD54L para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RAD54L definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.