Plasmide Double Nickase (m) RACK1: sc-420608-NIC

Rack1 code le récepteur de la protéine kinase C activée 1 (RACK1), une protéine d’échafaudage conservée à répétitions WD40 qui organise des complexes de signalisation multiprotéiques et relie les signaux issus des récepteurs aux voies kinasiques en aval. Dans les cellules de souris, RACK1 s’associe aux isoformes de la PKC et intègre la signalisation via les réseaux MAPK/ERK, les kinases de la famille Src et les voies liées à la PI3K, tout en agissant également au niveau de la sous-unité ribosomique 40S pour moduler l’initiation de la traduction et la synthèse de protéines en réponse au stress. Par ces fonctions, RACK1 influence l’adhésion cellulaire, la polarité, la migration et la progression du cycle cellulaire en coordonnant les voies d’adhésion focale et de remodelage du cytosquelette. Une signalisation et un contrôle traductionnel dépendants de RACK1 dérégulés ont été associés à des états de signalisation oncogéniques, à des circuits de signalisation inflammatoire et à des réponses altérées au stress cellulaire, ce qui en fait une cible fréquente d’études mécanistiques.

RACK1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Rack1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Rack1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Rack1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Rack1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.