Rab GDI β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404136

Descripción general

GDI2 codifica el inhibidor beta de la disociación de GDP de Rab (Rab GDI β), un regulador citosólico que se une a las GTPasas Rab preniladas y controla su ciclo entre las membranas y el citosol. Al modular la localización de Rab y su disponibilidad para la activación, Rab GDI β ayuda a coordinar los pasos de gemación, anclaje y fusión de vesículas, esenciales para el tráfico endocítico, las vías de reciclaje y el transporte del Golgi al endosoma. La alteración de la función de Rab GDI β puede desestabilizar la homeostasis del tráfico de membranas, afectando la renovación de receptores, la compartimentalización de la señalización y la dinámica de los orgánulos. La expresión o regulación alteradas de Rab GDI2 se han estudiado en el contexto de fenotipos celulares relevantes para la biología del cáncer y la neurobiología, donde el transporte vesicular y la proteostasis son fundamentales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rab GDI β (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GDI2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GDI2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GDI2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rab GDI β.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GDI2 para la investigación de la señalización de Rab GDI β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GDI2 críticos para la función de Rab GDI β
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GDI2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rab GDI β CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Rab GDI β CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GDI2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rab GDI β (h) y el plásmido HDR Rab GDI β (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GDI2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GDI2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.