Rab 9B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-412147-ACT

RAB9B kodiert die kleine GTPase Rab9B, ein Mitglied der RAB-Familie, die die Dynamik des vesikulären Transports durch einen regulierten GDP/GTP-Zyklus koordiniert. Rab9B ist am Transport vom späten Endosom zum trans-Golgi-Netzwerk sowie an der endosomalen Reifung beteiligt – Prozesse, die die lysosomale Zustellung, den Umsatz von Membranrezeptoren und die allgemeine Homöostase des Endomembransystems beeinflussen. Durch die Steuerung intrazellulärer Sortierung und retrograden Traffickings kann die RAB9B-Aktivität die Signalweitergabe und die Organellenfunktion in Zelltypen mit hohem Membranumsatz modulieren. Eine Dysregulation endolysosomaler Transportwege ist für die Forschung zu Neurodegeneration, Infektionsbiologie und der Anpassung von Krebszellen breit relevant, wodurch RAB9B einen nützlichen Angriffspunkt für mechanistische Untersuchungen darstellt.

Rab 9B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RAB9B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Rab 9B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RAB9B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RAB9B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Rab 9B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RAB9B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Rab 9B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Rab 9B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RAB9B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.