Rab 27b Double Nickase Plasmid (m2): sc-429802-NIC-2
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rab 27b Double Nickase Plasmid (m2) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rab 27b Double-Nickase-Plasmid (m2) und Rab 27b Double-Nickase-Plasmid (m22) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Rab27b abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rab 27b: sc-517602
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rab 27b Double Nickase Plasmid (m2) | sc-429802-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen Rab27b kodiert die kleine GTPase Rab27b, ein Mitglied der Ras-Superfamilie, das den Vesikeltransport reguliert, indem es über Interaktionen mit Effektoren wie Proteinen der Slp/Slac2-Familie und Myosinmotoren das Andocken und die Exozytose sekretorischer Granula sowie endosomenverwandter Organellen steuert. Die Rab27b-Aktivität trägt zur regulierten Sekretion, zur Dynamik lysosomenverwandter Organellen und zur Koordination des Zytoskeletts bei und unterstützt damit Prozesse wie die Freisetzung dichter Granula in Thrombozyten, die Degranulation von Neutrophilen und die sekretorische Funktion von Epithelzellen. Eine dysregulierte Rab27b-abhängige Trafficking-Kontrolle wurde in Krebsmodellen mit veränderten Entzündungsreaktionen und metastatischem Verhalten in Verbindung gebracht, wodurch dieses Ziel für Untersuchungen der sekretionsgetriebenen Umgestaltung des Mikromilieus nützlich ist. Rab27b-Reagenzien werden in der mechanistischen Forschung mit primären Mauszellen und in vivo-Modellen eingesetzt, um Granulabiogenese, die Regulation von Exosomen und Sekretom sowie Phänotypen des Vesikeltransports in der Immun- und Tumorbiologie zu analysieren.
Rab 27b Das Double-Nickase-Plasmid (m2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Rab27b-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Rab27b abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Rab27b-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Rab27b-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.