Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Rab 14 Double Nickase Plasmid (m): sc-427035-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rab 14 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rab 14 Double-Nickase-Plasmid (m) und Rab 14 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Rab14 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rab 14: sc-271401
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rab 14 Double Nickase Plasmid (m) | sc-427035-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab 14 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-427035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Rab14 kodiert die kleine GTPase Rab14, ein Mitglied der RAS-Superfamilie, das den intrazellulären Membrantransport koordiniert, indem es zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen zyklisch wechselt. Rab14 reguliert das endozytotische Recycling sowie den biosynthetischen Transport zwischen Golgi-Apparat, Endosomen und Plasmamembran und beeinflusst dabei die Sortierung von Fracht, den Rezeptorumsatz und die Vesikelreifung über Interaktionen mit Effektoren und der SNARE-Maschinerie. Diese Prozesse überschneiden sich mit Signalübertragung, Nährstoffaufnahme und der Organisation des Zytoskeletts, wodurch Rab14 ein geeigneter Knotenpunkt ist, um Störungen der Membrandynamik zu untersuchen. Eine fehlregulierte Rab14-abhängige Trafficking-Funktion wurde in der Literatur mit veränderter Zellmigration und metabolischer Homöostase in Verbindung gebracht und wird häufig in Modellen proliferativer und neurobiologischer Erkrankungen untersucht, bei denen vesikulärer Transport zum Phänotyp beiträgt.
Rab 14 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Rab14-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Rab14 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Rab14-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Rab14-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.