Plasmide Double Nickase (h) R1: sc-401712-NIC

RRM1 code la grande sous-unité catalytique (R1) de la ribonucléotide réductase, qui convertit les ribonucléotides en désoxyribonucléotides afin de fournir les dNTP nécessaires à la réplication et à la réparation de l’ADN. L’activité de R1 est étroitement coordonnée avec la progression du cycle cellulaire, la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN et les voies liées au stress réplicatif, afin de maintenir l’équilibre des pools de nucléotides et la stabilité du génome. Une expression ou une fonction déréglée de RRM1 est associée à une altération du contrôle de la prolifération, à une diminution de la capacité de réparation de l’ADN et à des phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour la biologie du cancer et les troubles du métabolisme des nucléotides. En tant que nœud central de l’homéostasie des dNTP, RRM1 est fréquemment étudié dans le contexte de la dynamique de réplication, de l’activation des points de contrôle (checkpoints) et du choix des voies de réparation de l’ADN.

R1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RRM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RRM1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RRM1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RRM1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.