QP-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423624

Übersicht

Uqcrq kodiert QP‑C, eine kleine akzessorische Untereinheit des mitochondrialen Atmungskettenkomplexes III (Ubiquinol‑Cytochrom‑c‑Reduktase), die den Zusammenbau und die Stabilität des Cytochrom‑bc1‑Komplexes in der inneren Mitochondrienmembran unterstützt. Durch die Beeinflussung des Elektronentransfers von Ubiquinol auf Cytochrom c trägt QP‑C zur oxidativen Phosphorylierung, zur Aufrechterhaltung des mitochondrialen Membranpotenzials und zum zellulären Redoxgleichgewicht bei. Störungen von Komponenten des Komplexes III können die ATP‑Produktion beeinträchtigen und mitochondriale reaktive Sauerstoffspezies erhöhen, wodurch Uqcrq‑abhängige Prozesse mit bioenergetischen Stressantworten und Apoptose‑Signalisierung verknüpft sind. In Mausmodellen ist Uqcrq daher relevant für mechanistische Studien mitochondrialer Dysfunktion in metabolisch aktiven Geweben sowie für die Modellierung von Signalwegen, die an neuromuskulären und kardiometabolischen Phänotypen beteiligt sind.

Das QP-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Uqcrq-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Uqcrq-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Uqcrq nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die QP-C-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Uqcrq-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der QP-C-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Uqcrq-Exone abzielen, die für die QP-C-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Uqcrq-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom QP-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom QP-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Uqcrq-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das QP-C HDR-Plasmid (m) und QP-C HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Uqcrq-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Uqcrq-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.