QIP1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-405442-LAC

KPNA4 kodiert Karyopherin alpha 4 (QIP1), ein Adapterprotein der Importin-α-Familie, das klassische nukleäre Lokalisationssignale erkennt und mit Importin-β zusammenwirkt, um einen RanGTP-abhängigen Import in den Zellkern zu vermitteln. Durch die Kontrolle des nukleozytoplasmatischen Transports beeinflusst KPNA4 die Verfügbarkeit von Transkriptionsfaktoren, DNA-Reparaturproteinen und Zellzyklusregulatoren im Zellkern und prägt dadurch Genexpressionsprogramme und Stressantworten. Veränderungen im Importin-α-vermittelten Transport wurden mit dysregulierter Proliferation, entzündlicher Signalübertragung und onkogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was KPNA4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Abhängigkeiten des nukleären Transports macht. KPNA4/QIP1 ist daher relevant für Untersuchungen der Kopplung von Signalwegen an Transkription, chromatinassoziierter Prozesse und krankheitsassoziierter Veränderungen der Dynamik des nukleären Imports.

QIP1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente KPNA4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

QIP1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der KPNA4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen QIP1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen KPNA4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.