pyridoxal phosphatase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406810

Übersicht

PDXP kodiert die Pyridoxal-Phosphatase, ein zytosolisches Enzym, das Pyridoxal-5′-phosphat (PLP), die aktive Form von Vitamin B6, hydrolysiert und damit zur zellulären Kontrolle der PLP-Verfügbarkeit sowie zur Homöostase der B6-Vitamer beiträgt. Da PLP ein essenzieller Kofaktor für zahlreiche Aminotransferasen, Decarboxylasen und Enzyme des Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsels sowie des neurotransmitterbezogenen Stoffwechsels ist, kann die PDXP-Aktivität indirekt den Aminosäureumsatz und breitere metabolische Flüsse beeinflussen. Über seine Rolle bei der Aufrechterhaltung des Kofaktorgleichgewichts ist PDXP für Studien zur metabolischen Anpassung, zu redoxgekoppelten Signalwegen und zur Enzym‑Kofaktor-Regulation relevant. Veränderungen im PLP-abhängigen Stoffwechsel wurden in unterschiedlichen krankheitsrelevanten Zusammenhängen beschrieben, was PDXP zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Untersuchungen stoffwechselassoziierter zellulärer Phänotypen macht.

Das pyridoxal phosphatase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PDXP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PDXP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PDXP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die pyridoxal phosphatase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PDXP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der pyridoxal phosphatase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PDXP-Exone abzielen, die für die pyridoxal phosphatase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PDXP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom pyridoxal phosphatase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom pyridoxal phosphatase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PDXP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das pyridoxal phosphatase HDR-Plasmid (h) und pyridoxal phosphatase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PDXP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PDXP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.