PTRF Plasmide Double Nickase (h): sc-404669-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PTRF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PTRF Double Nickase Plasmid (h) e il PTRF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CAVIN1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PTRF Antibody (4a): sc-517589
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PTRF Plasmide Double Nickase (h) | sc-404669-NIC | 20 µg | $410.00 |
CAVIN1 (PTRF) codifica il fattore di rilascio del trascritto della polimerasi I, una proteina essenziale associata alle caveole che coopera con le caveoline per promuovere la biogenesi delle caveole e stabilizzare i domini caveolari della membrana plasmatica. PTRF sostiene l’organizzazione della membrana, la meccanoprotezione e l’omeostasi lipidica regolando l’endocitosi caveolare e la segnalazione dipendente dalle caveole, influenzando processi quali la segnalazione del recettore dell’insulina e le risposte cellulari alla tensione di membrana. La perdita o la disfunzione di CAVIN1 altera la formazione delle caveole e modifica il traffico intracellulare e la compartimentalizzazione dei segnali, con effetti sulla biologia degli adipociti, sulla fisiologia muscolare e sulla funzione delle cellule vascolari. L’alterazione genetica di CAVIN1 è stata associata alla lipodistrofia generalizzata congenita e a fenotipi legati al muscolo, rendendolo un locus utile per studiare la biologia dei microdomini di membrana e la regolazione metabolica.
PTRF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CAVIN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CAVIN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CAVIN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CAVIN1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.