Plásmido Doble Nickase (h) PTRF: sc-404669-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PTRF consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PTRF (h) y el plásmido de doble nickasa PTRF (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CAVIN1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PTRF Anticuerpo (4a): sc-517589
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PTRF | sc-404669-NIC | 20 µg | $410.00 |
CAVIN1 (PTRF) codifica el factor de liberación del transcrito y de la polimerasa I, una proteína esencial asociada a las caveolas que coopera con las caveolinas para impulsar la biogénesis de caveolas y estabilizar los dominios caveolares de la membrana plasmática. PTRF favorece la organización de la membrana, la mecanoprotección y la homeostasis lipídica al regular la endocitosis caveolar y la señalización dependiente de caveolas, influyendo en procesos como la señalización del receptor de insulina y las respuestas celulares a la tensión de la membrana. La pérdida o disfunción de CAVIN1 altera la formación de caveolas y modifica el tráfico y la compartimentación de señales, afectando la biología de los adipocitos, la fisiología muscular y la función de las células vasculares. La alteración genética de CAVIN1 se ha vinculado con la lipodistrofia congénita generalizada y fenotipos relacionados con el músculo, lo que lo convierte en un locus útil para estudiar la biología de los microdominios de membrana y la regulación metabólica.
PTRF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CAVIN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CAVIN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CAVIN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CAVIN1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.