PTRF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404669

Descripción general

CAVIN1 codifica el factor de liberación del transcrito y polimerasa I (PTRF/cavin-1), un componente estructural central de las caveolas que coopera con las caveolinas para estabilizar invaginaciones de la membrana plasmática con forma de matraz. PTRF favorece la biogénesis y la dinámica de las caveolas, contribuyendo a la homeostasis lipídica, la endocitosis y la mecanoprotección, e influye en vías de transducción de señales organizadas en la superficie celular. A través de sus funciones en la organización y el tráfico de membranas, PTRF puede modular la disponibilidad de receptores y las respuestas de señalización posteriores ante estímulos mecánicos y metabólicos. La desregulación de CAVIN1/PTRF se ha asociado con una función caveolar alterada en la biología del músculo y del tejido adiposo, y se ha estudiado en contextos que incluyen fenotipos relacionados con lipodistrofia y el comportamiento de células tumorales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PTRF (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CAVIN1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CAVIN1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CAVIN1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PTRF.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CAVIN1 para la investigación de la señalización de PTRF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CAVIN1 críticos para la función de PTRF
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CAVIN1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PTRF CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PTRF CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CAVIN1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PTRF (h) y el plásmido HDR PTRF (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CAVIN1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CAVIN1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.