Plásmido CRISPR de Activación (h) PTRF: sc-404669-ACT

El gen humano CAVIN1 (PTRF) codifica el factor de liberación del transcrito y de la polimerasa I, un componente central de la familia cavin, necesario para la biogénesis de las caveolas y su estabilización en la membrana plasmática. PTRF coordina la curvatura de membrana dependiente de caveolina, la mecanoprotección y la endocitosis mediada por caveolas, influyendo en la compartimentalización de señales y la homeostasis lipídica. A través de su función en la organización de microdominios de membrana, PTRF afecta vías vinculadas a la señalización de la insulina, la diferenciación de adipocitos y la dinámica del citoesqueleto. Alteraciones en la función o expresión de CAVIN1/PTRF se han asociado con fenotipos relacionados con lipodistrofia, anomalías musculares y una señalización celular desregulada relevante para la biología del cáncer y la investigación de enfermedades metabólicas.

PTRF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAVIN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PTRF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAVIN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAVIN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PTRF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAVIN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PTRF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PTRF en células tumorales con expresión de CAVIN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.