Plasmide CRISPR/Cas9 KO PTPRH (h): sc-406293

Présentation

PTPRH (protéine tyrosine phosphatase réceptrice de type H) est une phosphatase transmembranaire de type « récepteur » qui module la signalisation de phosphorylation sur tyrosine à la surface cellulaire, en façonnant les voies en aval qui contrôlent la prolifération, l’adhérence et la motilité cellulaire. En contrebalançant l’activité des récepteurs tyrosine kinases et les sorties de signalisation associées des voies MAPK et PI3K/AKT, PTPRH peut influencer la réponse aux facteurs de croissance et le comportement des cellules épithéliales. Une expression ou une activité dérégulée de PTPRH a été associée à des états de signalisation oncogénique altérés et à des phénotypes liés aux tumeurs dans plusieurs contextes de cancer, ce qui en fait une cible pertinente pour disséquer les réseaux régulateurs dépendants de la phosphorylation. En tant que phosphatase associée à la membrane, elle est également utile pour étudier l’intégration des signaux entre les stimuli extracellulaires et les circuits intracellulaires kinases/phosphatases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PTPRH (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PTPRH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PTPRH, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PTPRH à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PTPRH.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PTPRH pour l'étude de la signalisation de PTPRH, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PTPRH essentiels à la fonction de PTPRH
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PTPRH pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PTPRH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PTPRH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PTPRH. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PTPRH plasmide HDR (h) et le PTPRH (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PTPRH pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PTPRH définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.