Plasmide CRISPR d'Activation (h) PTPζ: sc-401775-ACT

PTPRZ1 code la protéine tyrosine phosphatase réceptrice de type Z1 (PTPζ), une phosphatase de type récepteur enrichie dans le système nerveux central, qui module les états de phosphorylation des tyrosines à la surface cellulaire. PTPζ intègre des signaux extracellulaires provenant de ligands tels que la pléiotrophine et la midkine afin d’influencer l’adhésion et la migration cellulaires, ainsi que la croissance des neurites, en s’articulant avec des réseaux de signalisation comprenant les kinases de la famille SRC et les voies MAPK/ERK et PI3K/AKT. En régulant le comportement des cellules gliales et des progéniteurs neuronaux, PTPRZ1 contribue à des processus du développement et dépendants de l’activité dans le tissu neural. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de PTPRZ1 ont été associées à des états neuro-inflammatoires, à des pathologies démyélinisantes et à la biologie des gliomes, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de la signalisation neuronale et des interactions avec le microenvironnement.

PTPζ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTPRZ1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PTPζ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTPRZ1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTPRZ1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PTPζ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTPRZ1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PTPζ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PTPζ dans les cellules tumorales présentant une expression de PTPRZ1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.