Plasmide CRISPR/Cas9 KO PTP-H1 (h): sc-404194

Présentation

PTPN3 code la phosphatase à tyrosine non réceptrice PTP-H1, un régulateur cytosolique qui contrebalance la signalisation des kinases en déphosphorylant des résidus de phosphotyrosine sur des substrats récepteurs et non récepteurs. En modulant la dynamique de phosphorylation sur tyrosine, PTP-H1 influence des voies contrôlant la croissance cellulaire, l’adhésion et le remodelage du cytosquelette, avec des effets en aval sur la MAPK et d’autres réseaux de signalisation dépendants de la phosphorylation. Des altérations de l’activité ou de l’expression de PTPN3 ont été impliquées dans une transduction du signal dérégulée dans des contextes liés au cancer, ainsi que dans des phénotypes cellulaires associés à une migration et une invasion aberrantes. En tant que nœud de signalisation, PTP-H1 est fréquemment étudiée pour sa contribution au réglage fin des voies oncogéniques et au contrôle, dépendant du contexte, des sorties de signalisation des récepteurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PTP-H1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PTPN3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PTPN3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PTPN3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PTP-H1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PTPN3 pour l'étude de la signalisation de PTP-H1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PTPN3 essentiels à la fonction de PTP-H1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PTPN3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PTP-H1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PTP-H1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PTPN3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PTP-H1 plasmide HDR (h) et le PTP-H1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PTPN3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PTPN3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.