Psoriasin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418211-ACT

S100A7 kodiert Psoriasin, ein kalziumbindendes Protein der S100-Familie, das in mehrschichtigen Epithelien angereichert ist und unter entzündlichem Stress induziert wird. Psoriasin trägt zur epithelialen Differenzierung, zur Barriereabwehr und zur angeborenen Immun-Signalgebung bei und kann als schadensassoziierter Mediator wirken, der die Rekrutierung von Leukozyten und lokale Zytokin-Netzwerke formt. Es ist mit der Hyperproliferation von Keratinozyten und entzündlichen Programmen verbunden, die für Psoriasis und andere entzündliche Epithelzustände charakteristisch sind; zudem wurde seine Fehlregulation in mehreren Karzinomkontexten beschrieben, wo sie mit veränderter Zellmigration und Interaktionen zwischen Tumor und Mikroumgebung assoziiert ist. Diese Eigenschaften machen S100A7 zu einem geeigneten Knotenpunkt für die Untersuchung des Epithel–Immun‑Crosstalks, stressresponsiver Transkriptionsprogramme und kalziumabhängiger Signalprozesse.

Psoriasin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen S100A7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Psoriasin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des S100A7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der S100A7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Psoriasin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native S100A7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Psoriasin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Psoriasin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem S100A7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.