Partículas Lentivirales de Activación (h) PSGL-1: sc-401534-LAC

SELPLG codifica el ligando-1 de glicoproteína de la P-selectina (PSGL-1), una sialomucina similar a las mucinas expresada en los leucocitos que media el anclaje y el rodamiento sobre el endotelio activado mediante interacciones con la P-selectina y la E-selectina. Al coordinar la adhesión dependiente de selectinas bajo flujo con cizallamiento, PSGL-1 ayuda a regular el tráfico leucocitario, la extravasación y el posicionamiento de las células inmunitarias dentro de los tejidos inflamados, conectándose con vías que controlan la adhesión célula–célula, la migración impulsada por quimiocinas y la señalización inflamatoria. La alteración de la función de PSGL-1 o de su estado de glicosilación puede modificar la dinámica del reclutamiento de leucocitos y se ha estudiado en el contexto de afecciones inflamatorias crónicas, inflamación vascular y desregulación inmunitaria relevantes para la investigación en oncología y autoinmunidad.

Las partículas de activación lentiviral PSGL-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SELPLG en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PSGL-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SELPLG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PSGL-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SELPLG y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.