PRX III Double Nickase Plasmid (h): sc-401730-NIC

PRDX3 kodiert Peroxiredoxin III (PRX III), eine in den Mitochondrien lokalisierte, thioredoxinabhängige Peroxidase, die Wasserstoffperoxid und organische Hydroperoxide reduziert und so zur Aufrechterhaltung der Redoxhomöostase beiträgt. Durch die Kontrolle der mitochondrialen ROS-Spiegel beeinflusst PRX III die Effizienz der oxidativen Phosphorylierung, die mitochondriale Permeabilität sowie redoxsensitive Signalwege, darunter Apoptose- und Stressantwort-Netzwerke. Die Aktivität von PRDX3 steht mit der zellulären Anpassung an Hypoxie und metabolischer Reprogrammierung in Zusammenhang; eine veränderte Expression wurde mit Phänotypen oxidativen Stresses assoziiert, die in verschiedenen Krebsarten sowie in neurodegenerativen und entzündlichen Kontexten beobachtet werden. Als mitochondrialer Antioxidations-Knotenpunkt wird PRX III häufig im Hinblick auf seinen Einfluss auf Genomstabilität, Proteostase und die ROS-getriebene Modulation der Aktivität von Kinasen und Transkriptionsfaktoren untersucht.

PRX III Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PRDX3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PRDX3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PRDX3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PRDX3-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.