Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRR14 (m): sc-433320

Présentation

Prr14 code PRR14, une protéine nucléaire riche en proline impliquée dans l’organisation de l’architecture nucléaire via des interactions avec la lamina nucléaire et la chromatine. PRR14 contribue à l’ancrage de l’hétérochromatine à la périphérie du noyau, influençant l’état épigénétique, la stabilité du génome et les changements de l’organisation nucléaire liés au cycle cellulaire. Une régulation altérée des contacts lamina nucléaire–chromatine a été associée à des défauts des programmes de différenciation et à une signalisation proliférative aberrante, faisant de PRR14 un point d’entrée pertinent pour étudier la régulation génique dépendante de l’enveloppe nucléaire. Dans les systèmes murins, la perturbation de Prr14 peut aider à analyser comment l’organisation spatiale du génome s’articule avec le contrôle transcriptionnel et les voies de réponse au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRR14 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Prr14 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Prr14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Prr14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRR14.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Prr14 pour l'étude de la signalisation de PRR14, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Prr14 essentiels à la fonction de PRR14
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Prr14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRR14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PRR14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Prr14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRR14 plasmide HDR (m) et le PRR14 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Prr14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Prr14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.