Prohibitin Plasmide Double Nickase (m): sc-422218-NIC

Il gene murino **Phb** codifica la prohibitin, una proteina di impalcatura evolutivamente conservata, arricchita nella membrana interna mitocondriale, dove forma complessi ad alto peso molecolare con **PHB2** per stabilizzare i componenti della catena respiratoria e preservare l’architettura delle creste. La prohibitin influenza la proteostasi mitocondriale, il potenziale di membrana e la mitofagia, integrandosi con vie che regolano la fosforilazione ossidativa, l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno e il controllo del ciclo cellulare. Attraverso questi ruoli, **PHB** incide sull’adattamento metabolico e sulle risposte allo stress, spesso alterati nella neurodegenerazione, nelle disfunzioni cardiometaboliche e nella biologia dei tumori. **Phb** è quindi un bersaglio ampiamente utilizzato per studiare il controllo qualità mitocondriale e il crosstalk di segnalazione tra la funzione degli organelli e i programmi trascrizionali nucleari.

Prohibitin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Phb nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Phb. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Phb. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Phb interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.