Partículas Lentivirales de Activación (h) PRMT5: sc-401115-LAC

PRMT5 codifica la proteína arginina metiltransferasa 5, una importante metiltransferasa de tipo II que cataliza la dimetilación simétrica de residuos de arginina en histonas y en numerosos sustratos no histónicos. Mediante la regulación de la accesibilidad de la cromatina, los programas transcripcionales y el empalme (splicing) de ARN, PRMT5 influye en procesos centrales como la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN, la biogénesis de ribosomas y la expresión génica asociada a la pluripotencia/capacidad de autorrenovación. La actividad de PRMT5 se integra con redes epigenéticas y de señalización, como la transcripción impulsada por MYC, la modulación de la vía de p53 y el ensamblaje del espliceosoma mediante la metilación de proteínas Sm. La expresión o función desregulada de PRMT5 se ha asociado con proliferación alterada, especificación de linaje y transformación oncogénica en múltiples contextos tumorales, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar el control epigenético de fenotipos relevantes para la enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral PRMT5 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PRMT5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PRMT5 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PRMT5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PRMT5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PRMT5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.