PRKCDBP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407370

Panoramica

PRKCDBP (protein kinase C delta binding protein) è un adattatore citosolico implicato nella segnalazione associata a PKCδ, in cui influenza vie dipendenti dalla fosforilazione che regolano la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi e le risposte allo stress. La proteina è stata collegata alla modulazione di programmi trascrizionali e al controllo dei checkpoint, integrando segnali a monte provenienti da cascate di chinasi che orientano le decisioni cellulari di crescita e sopravvivenza. Un’alterata espressione di PRKCDBP è stata riportata in molteplici contesti tumorali, a supporto del suo studio nei meccanismi di controllo della proliferazione, nelle risposte al danno al DNA e nelle reti associate ai soppressori tumorali. Queste proprietà rendono PRKCDBP un bersaglio rilevante per analizzare dipendenze di segnalazione e fenotipi specifici del contesto in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRKCDBP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PRKCDBP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PRKCDBP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PRKCDBP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRKCDBP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PRKCDBP per lo studio della segnalazione di PRKCDBP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PRKCDBP critici per la funzione di PRKCDBP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PRKCDBP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRKCDBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PRKCDBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PRKCDBP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRKCDBP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PRKCDBP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PRKCDBP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PRKCDBP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.