Particules Lentivirales d'Activation (h) Prickle4: sc-412059-LAC

PRICKLE4 code Prickle4, un régulateur conservé de la signalisation de la polarité planaire cellulaire (PCP) qui aide à coordonner des comportements cellulaires directionnels en modulant l’activité de la voie Wnt non canonique/PCP. Grâce à ses interactions avec les composants centraux de la PCP et des régulateurs cytosquelettiques en aval, Prickle4 peut influencer la polarité cellulaire, l’adhérence et la motilité, des processus importants pour l’organisation tissulaire et la morphogenèse. Une signalisation PCP altérée est impliquée dans des anomalies du développement et des phénotypes associés au cancer, tels qu’une migration et une invasion aberrantes, ce qui fait de PRICKLE4 un nœud utile pour des études mécanistiques des voies de signalisation. Dans des modèles de cellules humaines, l’étude de l’expression de PRICKLE4 et des programmes transcriptionnels en aval peut préciser comment les signaux PCP s’intègrent à la dynamique des petites GTPases et du cytosquelette.

Les particules d'activation lentivirales Prickle4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PRICKLE4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Prickle4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PRICKLE4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Prickle4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PRICKLE4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.