Prickle4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412059-ACT

PRICKLE4 codifica a Prickle4, um membro da família Prickle de reguladores da polaridade celular planar, que coordenam comportamentos celulares direcionais durante o desenvolvimento e a organização dos tecidos. As proteínas Prickle participam da sinalização Wnt/PCP não canônica, influenciando a dinâmica do citoesqueleto, o estabelecimento da polaridade celular e a migração polarizada, com efeitos a jusante sobre a morfogênese e a arquitetura epitelial. A desregulação de componentes da PCP pode perturbar o movimento celular e processos dependentes de polaridade, os quais são frequentemente implicados em anomalias do desenvolvimento e nos programas migratórios alterados observados na biologia do câncer. Assim, a expressão de PRICKLE4 e a atividade dessa via são de interesse para estudos mecanísticos que ligam a sinalização Wnt/PCP ao controle da forma celular, à adesão e ao padrão tecidual.

Prickle4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRICKLE4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Prickle4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRICKLE4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRICKLE4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Prickle4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRICKLE4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Prickle4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Prickle4 em células tumorais com expressão de PRICKLE4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.