Plásmido CRISPR de Activación (h) PRC1: sc-401679-ACT

PRC1 (regulador proteico de la citocinesis 1) codifica una proteína asociada a los microtúbulos que organiza el huso central y el cuerpo medio durante la mitosis tardía, coordinando la formación de la zona media del huso y la finalización de la citocinesis. Su actividad se regula a lo largo del ciclo celular y se integra con la señalización de quinasas mitóticas, incluidas vías que controlan el agrupamiento de microtúbulos, la progresión de la anafase y la abscisión. La expresión o regulación alterada de PRC1 puede perturbar la segregación cromosómica y la fidelidad de la citocinesis, procesos vinculados a la inestabilidad genómica y a fenotipos proliferativos observados en múltiples contextos de cáncer. Por ello, PRC1 se utiliza ampliamente como marcador y como nodo mecanístico para estudiar el control mitótico, la temporización de la división celular y la dinámica de los microtúbulos en células humanas.

PRC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PRC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PRC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PRC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PRC1 en células tumorales con expresión de PRC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.