Plásmido CRISPR de Activación (h) PR3: sc-402550-ACT

PRTN3 codifica la proteinasa 3 (PR3), una proteasa de serina de neutrófilos almacenada en gránulos azurófilos y movilizada hacia los fagosomas y la superficie celular durante la activación de la inmunidad innata. PR3 contribuye a la defensa antimicrobiana y a la señalización inflamatoria mediante el procesamiento proteolítico de componentes de la matriz extracelular, citocinas y redes de quimiocinas, interactuando con las vías de degranulación, formación de NETs y tráfico leucocitario. La actividad desregulada de PR3 y el reconocimiento inmunitario aberrante se asocian con lesión tisular inflamatoria y constituyen importantes lecturas mecanísticas en estudios de patología impulsada por neutrófilos, incluidos procesos vasculíticos autoinmunes. Por ello, la dinámica de expresión de PRTN3 se evalúa con frecuencia en modelos de diferenciación mieloide, ensayos de señalización inflamatoria y mapeo de vías proteasa-sustrato.

PR3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRTN3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PR3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRTN3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRTN3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PR3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRTN3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PR3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PR3 en células tumorales con expresión de PRTN3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.