Particules Lentivirales d'Activation (h) PPP1R12C: sc-412332-LAC

PPP1R12C code la sous-unité 3 de ciblage de la phosphatase de la myosine (MYPT3), un composant régulateur de la protéine phosphatase 1 qui contribue à orienter l’activité catalytique de PP1 vers des substrats du cytosquelette. En contrôlant les états de phosphorylation de la chaîne légère de la myosine et d’autres régulateurs apparentés de l’actomyosine, PPP1R12C participe à la contractilité cellulaire, à la dynamique de l’adhésion et à la motilité, en intégrant des signaux issus de RhoA/ROCK et d’autres voies de kinases. Une altération du ciblage de PP1 et de la fonction de la phosphatase de la myosine peut perturber le remodelage du cytosquelette et la mécanotransduction, des processus fréquemment impliqués dans l’invasion des cellules tumorales, le remodelage associé à la fibrose et le dysfonctionnement du muscle lisse vasculaire. L’expression de PPP1R12C et sa régulation dépendante de la phosphorylation sont donc pertinentes pour des études sur l’organisation des fibres de stress, le contrôle de la forme cellulaire et le dialogue entre voies de signalisation modulant les phénotypes contractiles.

Les particules d'activation lentivirales PPP1R12C (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PPP1R12C dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PPP1R12C (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PPP1R12C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PPP1R12C. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PPP1R12C ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.