Plasmide CRISPR d'Activation (h) POGZ: sc-410566-ACT

POGZ (protéine dérivée d’un élément transposable pogo avec doigt de zinc) est un facteur nucléaire associé à la chromatine qui régule des programmes transcriptionnels en coordonnant la liaison à l’ADN et les interactions protéine–protéine au niveau des régions régulatrices des gènes. Elle contribue à l’organisation de la chromatine et à la stabilité du génome en influençant la progression mitotique et la cohésion des chromatides sœurs via des interactions avec des machineries liées à l’hétérochromatine, ce qui affecte le contrôle du cycle cellulaire et les réseaux d’expression génique du développement. Une dérégulation de la régulation de la chromatine dépendante de POGZ a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une différenciation neuronale altérée, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du contrôle transcriptionnel lors du développement cérébral. Dans les cellules humaines, POGZ est fréquemment étudiée dans le contexte de la régulation épigénétique, de la spécification du destin cellulaire et des effets, au niveau des voies, sur les programmes d’expression de l’ARN.

POGZ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de POGZ sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

POGZ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus POGZ dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription POGZ, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de POGZ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus POGZ natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de POGZ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie POGZ dans les cellules tumorales présentant une expression de POGZ silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.