PNP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404914

Übersicht

Purinnukleosid-Phosphorylase (PNP) ist ein zytosolisches Enzym des Purin-Salvage-Wegs, das die Phosphorolyse der Nukleoside Inosin und Guanosin katalysiert und dabei Hypoxanthin bzw. Guanin erzeugt. Dadurch unterstützt es die Nukleotidhomöostase und das Recycling. Durch die Steuerung des Gleichgewichts von Purinmetaboliten beeinflusst PNP den zellulären Energiestatus, das Redoxmilieu und die Verfügbarkeit von DNA-/RNA-Vorstufen, was nachgelagert Auswirkungen auf Proliferation und Stressantworten hat. Die PNP-Aktivität ist besonders wichtig für den Stoffwechsel von Immunzellen, in denen der Purinumsatz das Überleben und die Funktion von Lymphozyten moduliert. Eine Fehlregulation oder angeborene PNP-Defizienz ist mit Immundefizienz-Phänotypen und einer veränderten Anreicherung von Purinmetaboliten assoziiert, was PNP zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien metabolismusgekoppelter Entscheidungen über das Zellschicksal macht.

Das PNP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PNP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PNP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PNP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PNP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PNP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PNP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PNP-Exone abzielen, die für die PNP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PNP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PNP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PNP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PNP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PNP HDR-Plasmid (h) und PNP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PNP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PNP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.