Plásmido CRISPR de Activación (h) PLVAP/PV1: sc-403746-ACT

PLVAP (proteína asociada a vesículas del plasmalema), también conocida como PV1, es una glucoproteína de membrana restringida al endotelio que organiza los diafragmas de las fenestraciones, las caveolas y los canales transendoteliales, regulando así la permeabilidad vascular y el transporte de macromoléculas. Al moldear las propiedades de la barrera endotelial y el tráfico vesicular, PLVAP se relaciona con procesos como la remodelación angiogénica, la extravasación de leucocitos y la especialización microvascular específica de cada tejido. La expresión alterada de PLVAP se utiliza con frecuencia como marcador de activación endotelial y de neovascularización patológica, y se ha asociado con la fuga vascular inflamatoria y el endotelio asociado a tumores. Estas características hacen de PLVAP un nodo útil para estudiar la función microvascular, los estados de diferenciación endotelial y los fenotipos relacionados con la permeabilidad en modelos celulares humanos.

PLVAP/PV1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PLVAP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PLVAP/PV1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PLVAP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PLVAP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PLVAP/PV1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PLVAP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PLVAP/PV1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PLVAP/PV1 en células tumorales con expresión de PLVAP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.