Plasmide CRISPR/Cas9 KO PLC β3 (h): sc-401181

Présentation

PLCB3 code la phospholipase C bêta 3 (PLCβ3), un effecteur associé à la membrane situé en aval des GPCR et de certains signaux de récepteurs à activité tyrosine kinase, qui hydrolyse le PIP2 pour générer les seconds messagers IP3 et DAG. Cette réaction entraîne la mobilisation du Ca2+ intracellulaire et l’activation de la protéine kinase C, façonnant des programmes de transduction du signal qui régulent la prolifération, la migration, la sécrétion et la fonction des cellules immunitaires. L’activité de PLCβ3 s’intègre aux signalisations calciques, aux cascades MAPK et au remodelage du cytosquelette, reliant les signaux extracellulaires à des réponses transcriptionnelles et métaboliques. Une dérégulation des voies de signalisation associées à PLCB3 a été impliquée dans des contextes oncogéniques et inflammatoires, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer l’architecture des voies dans des modèles cellulaires pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PLC β3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PLCB3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PLCB3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PLCB3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PLC β3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PLCB3 pour l'étude de la signalisation de PLC β3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PLCB3 essentiels à la fonction de PLC β3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PLCB3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PLC β3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PLC β3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PLCB3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PLC β3 plasmide HDR (h) et le PLC β3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PLCB3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PLCB3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.