Plasmide Double Nickase (h) PKR: sc-400177-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PKR correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PKR Double Nickase (h) et le plasmide PKR Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EIF2AK2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PKR Antibody (B-10): sc-6282
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PKR | sc-400177-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PKR | sc-400177-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF2AK2 code pour PKR, une sérine/thréonine kinase inductible par l’interféron, qui agit comme capteur cytosolique de l’ARN double brin lors des réponses antivirales et de l’immunité innée. Une fois activée, PKR phosphoryle eIF2α afin d’inhiber l’initiation de la traduction, remodelant ainsi la protéostasie cellulaire et favorisant des programmes d’adaptation au stress tels que la réponse intégrée au stress. PKR interfère également avec les voies de signalisation NF-κB et MAPK, contribuant à l’expression de gènes inflammatoires ainsi qu’à la régulation de l’apoptose et de l’autophagie. Une activité dérégulée d’EI F2AK2/PKR a été associée à des interactions hôte–pathogène altérées, à une inflammation chronique et à des modifications de la signalisation liée au stress observées dans divers contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud mécanistique utile en immunologie et dans l’étude du stress cellulaire.
PKR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF2AK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF2AK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF2AK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF2AK2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.