Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PKM Double Nickase Plasmid (h): sc-400834-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PKM Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PKM Double-Nickase-Plasmid (h) und PKM Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PKM abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PKM: sc-365684
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PKM Double Nickase Plasmid (h) | sc-400834-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PKM Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400834-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PKM kodiert die Pyruvatkinase M, ein geschwindigkeitsbestimmendes Enzym der Glykolyse, das die Umwandlung von Phosphoenolpyruvat zu Pyruvat unter gleichzeitiger ATP-Bildung katalysiert und dadurch den Glukoseabbau mit der zellulären Energiebilanz koppelt. Alternative Isoformen (PKM1/PKM2) unterstützen unterschiedliche metabolische Zustände, wobei PKM2 die Umleitung glykolytischer Zwischenprodukte in anabole Wege ermöglicht, die Biomasseproduktion und Redoxhomöostase aufrechterhalten. Die PKM-Aktivität ist mit dem zentralen Kohlenstoffstoffwechsel verknüpft, einschließlich des Pentosephosphatwegs und der Laktatbildung, und prägt so Nährstoffsensorik und Stressantworten. Eine fehlregulierte PKM-Expression oder veränderte Isoformnutzung wird häufig im Kontext metabolischer Reprogrammierung, Proliferation und veränderter Bioenergetik in verschiedensten Krankheitsmodellen untersucht.
PKM Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PKM-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PKM abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PKM-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PKM-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.