PKC gamma Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400503-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PKC gammaO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PKC gamma (h) e o Plasmídeo Double Nickase PKC gamma (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PRKCG. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PKC gamma Anticorpo (C-4): sc-166385
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PKC gamma Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400503-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PKC gamma Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400503-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKCG codifica a proteína quinase C gama (PKCγ), uma quinase de serina/treonina enriquecida em neurônios, ativada por Ca2+ e diacilglicerol, que conecta a sinalização de membrana ao controle, dependente de fosforilação, da excitabilidade e da função sináptica. A PKCγ integra sinais a montante provenientes da via da fosfolipase C para modular o remodelamento do citoesqueleto, o tráfego vesicular e a transcrição dependente de atividade, por meio de vias que convergem com MAPK/ERK e outras cascatas de quinases. Em tecidos humanos, PRKCG é altamente expresso no sistema nervoso central, onde alterações na sinalização de PKCγ e variações na sequência codificante têm sido associadas a fenótipos neurodegenerativos e do neurodesenvolvimento. A perturbação experimental de PRKCG é comumente usada para dissecar mecanismos de transdução de sinal que regem a plasticidade neuronal, a atividade de redes e mudanças no proteoma impulsionadas por fosforilação.
PKC gamma O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PRKCG em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PRKCG. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PRKCG. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PRKCG interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.