PIPK I α Lentiviral Activation Particles (h): sc-403490-LAC

PIP5K1A kodiert die Phosphatidylinositol-4-phosphat-5-Kinase Typ I alpha (PIPK I α), eine zentrale Lipidkinase, die an der Plasmamembran und an Endomembranen Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphat (PI(4,5)P2) erzeugt. Durch die Kontrolle lokaler PI(4,5)P2-Pools reguliert PIPK I α den Umbau des Aktin-Zytoskeletts, den Membrantransport sowie phosphoinositidabhängige Signalwege, darunter PI3K–AKT- und PLC-getriebene Signalwege, die die Kalziumdynamik und die Bildung von Second Messengern beeinflussen. Die Aktivität von PIPK I α unterstützt Prozesse wie Zellmigration, Adhäsion und Rezeptor-Endozytose durch die Modulation von fokalen Adhäsionen und Netzwerken kleiner GTPasen. Eine dysregulierte Phosphoinositid-Metabolisierung unter Beteiligung von PIP5K1A wurde mit veränderten proliferativen und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext der Krebsbiologie, der Signalübertragung in Immunzellen und der Neurobiologie untersucht.

PIPK I α Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PIP5K1A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PIPK I α Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PIP5K1A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PIPK I α-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PIP5K1A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.