Plásmido Doble Nickase (m) Pilt: sc-428717-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Pilt consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Pilt (m) y el plásmido de doble nickasa Pilt (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Tjap1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Pilt | sc-428717-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen Tjap1 de ratón codifica Pilt, un factor asociado a las uniones celulares implicado en la organización de los contactos célula–célula epiteliales y en la coordinación de la dinámica del citoesqueleto que influye en la formación de la barrera y la arquitectura tisular. Pilt se vincula a procesos como el ensamblaje de las uniones estrechas, el mantenimiento de la polaridad y la regulación de la permeabilidad paracelular mediante el andamiaje de complejos proteicos y la comunicación cruzada de señales. La alteración de la homeostasis de las uniones puede afectar la proliferación, la diferenciación y la señalización inflamatoria, lo que convierte a Tjap1 en un locus útil para estudiar los mecanismos que subyacen a la disfunción epitelial en contextos relevantes para la enfermedad. Investigar Tjap1 permite el mapeo funcional de las vías de las uniones, los programas de morfología celular y las respuestas al estrés en modelos murinos.
Pilt El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Tjap1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Tjap1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Tjap1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Tjap1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.