Plasmide CRISPR d'Activation (h) PIASy: sc-403125-ACT

PIAS4 humain code PIASy, une ligase E3 de SUMO et un corégulateur transcriptionnel qui module la stabilité des protéines, leur localisation subcellulaire et l’activité des facteurs de transcription via la SUMOylation. PIASy participe aux réponses au stress et aux signalisations inflammatoires en régulant des voies telles que JAK/STAT et NF-κB, et contribue aux réponses aux dommages de l’ADN en influençant l’activité de régulateurs nucléaires clés. En remodelant des programmes transcriptionnels liés à la prolifération, à l’apoptose et aux réponses immunitaires, PIASy a été impliquée dans des contextes pertinents pour la signalisation oncogénique, la dérégulation immunitaire et la stabilité du génome. Son rôle central dans les modifications post-traductionnelles fait de PIAS4 un nœud utile pour des études mécanistiques du contrôle SUMO-dépendant des réseaux de signalisation nucléaires.

PIASy Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PIAS4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PIASy Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PIAS4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PIAS4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PIASy. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PIAS4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PIASy au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PIASy dans les cellules tumorales présentant une expression de PIAS4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.