Partículas Lentivirales de Activación (m) PI 3-kinase p110δ: sc-422232-LAC
- Especies Diana: mouse
- 200 µl de Partículas Lentivirales de Activación CRISPR/dCas listas para usar
- Partículas Lentivirales de Acitvación (m) PI 3-kinase p110δ es un sistema de activación de la trascripción por mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen determinado a través de la tranducción lentiviral de las células
- Partículas Lentivirales de Acitvación (m) PI 3-kinase p110δ incluyen los siguientes elementos activadores SAM: plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada, (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y un plásmido que codifica la secuencia de diana específica de 20 nt de ARN. También contienen genes de resistencia a blasticidina, higromicina y puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación génica
- Los gRNA codificados por el PI 3-kinase p110δ Plásmido de activación lentiviral (m) y el PI 3-kinase p110δ Plásmido de activación lentiviral (m2) se dirigen a regiones reguladoras distintas del promotor Pik3cd. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia de la activación génica puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PI 3-kinase p110δ Anticuerpo (A-8): sc-55589
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Partículas Lentivirales de Activación (m) PI 3-kinase p110δ | sc-422232-LAC | 200 µl | $455.00 |
Pik3cd codifica la subunidad catalítica p110δ de la fosfoinosítido 3-quinasa de clase I, una enzima clave que fosforila PIP2 para generar PIP3 y propagar la señalización PI3K–AKT–mTOR. En los linajes inmunitarios y hematopoyéticos del ratón, p110δ ayuda a acoplar las señales de los receptores de antígeno y de citocinas con el control posterior de la supervivencia, la proliferación, el metabolismo y la quimiotaxis celular, incluidos efectos sobre programas transcripcionales dependientes de NF-κB y FOXO. La actividad alterada de Pik3cd se estudia ampliamente por su impacto en la activación de linfocitos, la señalización inflamatoria y la homeostasis inmunitaria, con relevancia para modelos de desregulación inmunitaria y de reconfiguración oncogénica de vías de señalización. Estas funciones hacen de Pik3cd un nodo útil para desentrañar redes de transducción de señales que determinan decisiones de destino celular en células inmunitarias.
Las partículas de activación lentiviral PI 3-kinase p110δ (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Pik3cd en una gama más amplia de tipos de células humanas.
Las partículas de activación lentiviral PI 3-kinase p110δ (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Pik3cd, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PI 3-kinase p110δ. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Pik3cd y la arquitectura reguladora.
El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.