Phocein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418293

Übersicht

MOB4 kodiert das menschliche Protein Phocein, eine konservierte Scaffold‑Komponente, die über die Assoziation mit STRIPAK-/PP2A-gekoppelten Komplexen und verwandten Serin/Threonin‑Kinasenetzwerken an der Regulation der Hippo‑Signalwegaktivität beteiligt ist. Phocein trägt zur Koordination von Zellpolarität, Zytoskelettorganisation und Vesikeltransportprozessen bei, die Proliferation und Migration beeinflussen. Über diese Signalplattformen wird MOB4 mit der Kontrolle des Gewebewachstums und stressresponsiven Signalknoten in Verbindung gebracht, die in krebsassoziierten Signalwegen häufig gestört sind. Die Aufklärung der Phocein‑Funktion unterstützt mechanistische Studien zur Signalweg‑Crosstalk, der die YAP/TAZ‑Aktivität, Phosphorylierungsdynamiken und kontextabhängige Zellschicksalsentscheidungen beeinflusst.

Das Phocein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MOB4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MOB4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MOB4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Phocein-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MOB4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Phocein-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MOB4-Exone abzielen, die für die Phocein-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MOB4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Phocein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Phocein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MOB4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Phocein HDR-Plasmid (h) und Phocein HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MOB4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MOB4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.