PHF5A Plasmide Double Nickase (h): sc-407986-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PHF5A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PHF5A Double Nickase Plasmid (h) e il PHF5A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PHF5A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PHF5A Plasmide Double Nickase (h) | sc-407986-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PHF5A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407986-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PHF5A (PHD finger protein 5A) è un componente evolutivamente conservato del sottocomplesso SF3b dello snRNP U2 e funge da adattatore cruciale nello splicing del pre‑mRNA e nel riconoscimento dei siti di splicing durante le fasi iniziali dell’assemblaggio dello spliceosoma. Stabilizzando le interazioni nella regione del punto di ramificazione (branch point), PHF5A favorisce una corretta rimozione degli introni e influenza programmi di splicing alternativo che modellano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e gli stati di differenziamento. La disfunzione dello spliceosoma e le dipendenze da fattori di splicing sono caratteristiche ricorrenti di sistemi cellulari proliferativi e adattati allo stress, rendendo PHF5A un nodo utile per studiare il controllo dell’elaborazione dell’RNA. La perturbazione di PHF5A è stata associata a un’alterazione dell’equilibrio tra isoforme trascrizionali e a un rimodellamento delle vie a valle, rilevante in modelli di instabilità genomica e di segnalazione oncogenica.
PHF5A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PHF5A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PHF5A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PHF5A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PHF5A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.