PFKFB3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404532

Übersicht

PFKFB3 kodiert die 6-Phosphofructo-2-kinase/Fructose-2,6-bisphosphatase 3, ein bifunktionales Enzym, das die intrazellulären Fructose-2,6-bisphosphat-Spiegel reguliert, um die Aktivität der Phosphofructokinase-1 und den glykolytischen Fluss feinzujustieren. In menschlichen Zellen unterstützt PFKFB3 eine hochaktive Glykolyse und koordiniert die metabolische Anpassung an Wachstumsfaktor-Signale, Nährstoffverfügbarkeit und Stressantworten, wodurch der Kohlenhydratstoffwechsel mit der Zellzyklusprogression und dem biosynthetischen Bedarf verknüpft wird. Seine Aktivität überschneidet sich mit hypoxie- und onkogenassoziierten Programmen und wurde in Kontexten untersucht, in denen metabolische Umprogrammierung Proliferation, Migration und inflammatorische Signalgebung beeinflusst. Eine dysregulierte PFKFB3-Expression und gestörte Kontrolle der Glykolyse wurden in mehreren krankheitsrelevanten Modellen beschrieben, darunter Krebsstoffwechsel sowie die Aktivierung von Gefäß- oder Immunzellen.

Das PFKFB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PFKFB3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PFKFB3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PFKFB3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PFKFB3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PFKFB3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PFKFB3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PFKFB3-Exone abzielen, die für die PFKFB3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PFKFB3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PFKFB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PFKFB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PFKFB3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PFKFB3 HDR-Plasmid (h) und PFKFB3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PFKFB3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PFKFB3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.