Peroxin 10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406226

Übersicht

PEX10 kodiert Peroxin 10, eine RING-Finger-E3-Ubiquitin-Ligase, die in die peroxisomale Membran eingebettet ist und für die Biogenese von Peroxisomen sowie den Import von Matrixproteinen essenziell ist. Als Teil der peroxisomalen Ubiquitinierungsmaschinerie zusammen mit PEX2 und PEX12 trägt PEX10 zur Regulation des Recyclings des Importrezeptors PEX5 bei und unterstützt peroxisomale Stoffwechselwege, darunter die β-Oxidation sehr langkettiger Fettsäuren und die Aufrechterhaltung der Homöostase reaktiver Sauerstoffspezies. Eine Störung von PEX10 beeinträchtigt den Aufbau von Peroxisomen und verschlechtert den Lipidstoffwechsel sowie das Redoxgleichgewicht – Prozesse, die zentral für zelluläre Stressantworten und die Kommunikation zwischen Organellen sind. Pathogene Varianten in PEX10 sind mit Peroxisomen-Biogenese-Störungen im Zellweger-Spektrum assoziiert und machen das Gen zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung von Mechanismen der Organell-Dysfunktion.

Das Peroxin 10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PEX10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PEX10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PEX10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Peroxin 10-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PEX10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Peroxin 10-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PEX10-Exone abzielen, die für die Peroxin 10-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PEX10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Peroxin 10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Peroxin 10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PEX10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Peroxin 10 HDR-Plasmid (h) und Peroxin 10 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PEX10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PEX10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.