Perilipin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401305-ACT

PLIN1 kodiert Perilipin‑1, ein mit Lipidtröpfchen assoziiertes Scaffold‑Protein, das in Adipozyten die Speicherung und Mobilisierung neutraler Lipide reguliert, indem es den Zugang von Lipasen wie ATGL und der hormonsensitiven Lipase zu Triacylglycerol steuert. Über phosphorylierungsabhängige Umbauprozesse verknüpft Perilipin die cAMP/PKA‑Signalgebung mit lipolytischen und lipogenen Programmen und beeinflusst damit den Fettsäurefluss, die Adipozytengröße und die Dynamik der Lipidtröpfchen. Eine veränderte PLIN1‑Expression oder ‑Funktion wurde mit einer gestörten Homöostase des Fettgewebes, insulinresistenzassoziierten metabolischen Phänotypen und lipodystrophieähnlichen Erscheinungsbildern in Verbindung gebracht, was PLIN1 zu einem relevanten Knotenpunkt in Studien zur Adipozytenbiologie und zur systemischen Energiebilanz macht. In Zellmodellen überschneidet sich die PLIN1‑Aktivität mit Signalwegen, die die mitochondriale Substratnutzung, ER‑Stress‑Antworten auf Lipidüberladung sowie inflammatorische Signalgebung infolge ektopischer Lipidakkumulation steuern.

Perilipin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PLIN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Perilipin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PLIN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PLIN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Perilipin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PLIN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Perilipin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Perilipin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PLIN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.