Plasmide CRISPR d'Activation (h) Pepsin C: sc-404137-ACT

PGC code la pepsine C (progastricsine), une endopeptidase aspartique produite principalement par les cellules principales gastriques et sécrétée sous forme de zymogène inactif, qui devient protéolytiquement active en milieu acide. Une fois activée, la pepsine C contribue au traitement des protéines dans la lumière digestive et soutient la physiologie de la muqueuse gastrique grâce à une sécrétion régulée et à une activité protéasique au sein du réseau des enzymes digestives. Les profils d’expression aberrants de PGC sont largement utilisés comme indicateurs d’une différenciation altérée de l’épithélium gastrique et d’un remodelage muqueux, reliant ce gène aux recherches sur l’inflammation gastrique, la métaplasie et la transformation néoplasique. En tant que gène de protéase enrichi dans l’estomac, PGC est également utile pour étudier les programmes de lignée épithéliale et les modifications de la protéostasie associées à la biologie des maladies gastriques.

Pepsin C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PGC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pepsin C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PGC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PGC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pepsin C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PGC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pepsin C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pepsin C dans les cellules tumorales présentant une expression de PGC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.